《CAR-T細胞治 療產品質量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》一文提到：目前RCR/RCL病毒檢測方法主要有指示細胞培養法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應）和轉錄酶活性測定法(PERT)等。其中，利用指示細胞培養法對生產過程中的病毒（上清液、病毒生產終末期細胞）存在的RCL進行培養擴增，并在培養終點進行重復檢測是FDA推薦的RCL檢測方法。
《CAR-T細胞治 療產品質量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》一文提到：目前RCR/RCL病毒檢測方法主要有指示細胞培養法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應）和轉錄酶活性測定法(PERT)等。其中，利用指示細胞培養法對生產過程中的病毒（上清液、病毒生產終末期細胞）存在的RCL進行培養擴增，并在培養終點進行重復檢測是FDA推薦的RCL檢測方法。 南京正揚有復制型病毒檢測試劑盒試劑盒的裝量是多少？廣州PCR法病毒檢測試劑盒
美國FDA要求對于采用γ-逆轉錄病毒載體和慢病毒載體的產品，需要在整個生產過程及不同階段進行RCR復制型逆轉錄病毒／RCL復制型慢病毒檢測，針對載體生產用主細胞庫、工作細胞庫、生產終末細胞、載體上清液及在體外培養超過4天的載體轉到細胞進行檢測。針對慢病毒載體使用時RCL的檢測，除了金標準——指示細胞培養法，還需要選擇2種不同原理的快檢方法對其進行補充檢測。RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩定性好等優點，是RCR/RCL補充檢測的優 選方法。蘇州復制型慢病毒檢測操作流程重組腺相關病毒檢測。
實時定量PCR方法(Q-PCR法)復制型慢病毒檢測原理：目前許多CAR-T申報企業采用Q-PCR／PCR方法直接測定終產品中的VSV-G序列或psi—gag序列，考慮到細胞產品一般需要新鮮輸注或快速凍存的特殊性，采用基于細胞培養方法，時間周期較長，建議在細胞產品制備過程中進行多面控制(如對慢病毒載體及生產終末細胞采用基于細胞培養方法測定RCL，以確保生產工藝過程中不存在RCL的風險)，細胞終產品階段可采用快速放行方法(如PCR方法)。基于Q-PCR法測定復制型慢病毒載體，主要是針對VSV-G序列設計定量引物，通過繪制標準曲線，對RCL予以定量。
復制型病毒/病毒載體回復突變（ReplicationCompetentVirus,RCV），可產生于病毒載體制造過程中的所有步驟當中。并且，RCV感 染宿主細胞后能隨宿主細胞在培養液中增殖、擴增對人體健康具有嚴重的隱患，是免疫細胞治 療類產品，如CAR-T產品的主要安全性風險之一。近年來，CAR-T細胞制備過程中，伴隨載體的不斷升級優化，重組產生的復制型逆轉錄病毒/慢病毒(ReplicationCompetentRetrovirus/Lentivirus,RCR/RCL)逐漸降低，但產生RCR/RCL的風險隱患至今仍不能完全排除。由2022年5月發布的《體外基因修飾系統藥學研究與評價技術指導原則（試行）》指出RCR/RCL檢測作為安全性檢測在細胞藥物的研發和生產過程中至關重要，相關產品不得檢出RCR/RCL，可知病毒載體相關產品中，RCR/RCL病毒檢測至關重要。qPCR法復制型慢病毒檢測的工作流程。
rcAAV復制型腺相關病毒檢測過程中，qPCR反應體系配制環節有哪些注意事項？①qPCR的整個操作要低溫環境進行，防止模板的降解，試劑避免反復凍融。②配制反應體系前試劑要充分混勻，除了模板外的反應體系要統一配制，然后再分配至qPCR管中，配制的時候考慮到操作或耗材帶來的損耗需要多配若干個反應所需體系。③添加模板的時候注意搶頭要排盡，不求快，平行加樣。加樣后要進行離心，將液體集中在管底，離心后注意觀察反應體系液面是否平整，氣泡是否排盡。④每個樣品建議做3個復孔，每次除了樣品以外還要加陽性對照和陰性對照。復制型病毒檢測試劑盒適用性樣品有哪些？rcAAV病毒檢測操作流程
南京正揚有復制型病毒檢測試劑盒試劑盒嗎？廣州PCR法病毒檢測試劑盒
用qPCR法進行rcAAV復制型腺相關病毒檢測時，出現擴增曲線末尾起跳的原因可能是什么？①陰性質控或無模板對照曲線末尾出現起跳情況，考慮環境存在污染所致，建議對實驗環境做好控制，如使用低吸附帶濾芯搶頭和低吸附ep管，保證實驗分區（樣品處理區、試劑保存及配制區、PCR擴增區）、用DNA清除劑處理環境等。②待測樣品曲線末尾出現起跳情況，在確保陰性質控或無模板對結果正常的情況下，可以進行復測，復測結果一致，則考慮是樣品中待測物濃度較低所致。廣州PCR法病毒檢測試劑盒