RT-PCR之前，如何去除樣品之中的基因組DNA污染物？

上海歸真儀器設備有限公司2024-11-16

如果在不含反轉錄酶的對照管/孔中生成擴增產物，必須從RNA樣品中去除殘留的基因組DNA。您可通過下述實驗方案從總RNA中去除基因組DNA。 在冰上，將以下成分添加到無菌的 0.5 mL微量離心管中： 1.總RNA，比較好小于或等于1 μg。（見下文注1。） 2.1.0 μL的10 X DNase緩沖液 (200 mM Tris, pH 8.3, 500 mM KCl, 20 mM MgCl2)。 3.0.1 U–3.0 U的DNase I（無RNase，貨號18047019）或1.0 U的擴增級Dnase I,（貨號18068015。參見下文注2。） 4.加入DEPC處理的水，將總體積加至10 μL。 5.在室溫下孵育15分鐘。（參見下文注3。） 6.加入1 μL 25 mM EDTA終止反應，并在65°C下加熱10分鐘。（參見下文注4。） 7.置于冰上1分鐘。 8.通過短暫的離心處理進行回收。這樣產生的混合物可直接用于反轉錄反應。

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