PCR熒光探針法

PCR的工作原理：在TaqDNA聚合酶（熱穩定DNA聚合酶）的作用下，由一對特異性引物經熱變性-退火-延伸反應，三個不同溫度的循環處理使得DNA由少量擴增到多量的一種體外DNA擴增技術。在反應體系內，以一對人工合成的寡核苷酸作為擴增引物，第一步，模板DNA變性，以構成脫氧核糖核酸的四種脫氧核苷酸為底物，目的基因作為模板，在DNA聚合酶的作用下模板DNA經過80-90℃高溫變性，使模板DNA雙鏈經PCR擴增形成的雙鏈解離成單鏈。第二步，模板DNA與引物退火（復性），模板DNA解離成單鏈后溫度降至50-60℃，引物與模板DNA單鏈互補配對。第三步，引物的延伸，DNA模板-引物結合物在DNA聚合酶作用下，70-75℃以dNTP為反應原料半保留復制合成一條新的模板DNA鏈。這三個步驟為一個循環，2-4分鐘即可完成一個循環，2-3小時就能使極微量的DNA、片段、甚至單拷貝基因復制到幾百萬倍，從而實現對靶DNA的放大。由于擴增堿基序列按照靶DNA復制，因此PCR反應具有高度特異性。巧亦捷核酸一體機靈敏度高，可以做到早期診斷，實現及時診療，減少患病動物痛苦，獲得更好的療效。PCR熒光探針法

市面上現有PCR儀器都有以下幾個弊端：1.由于PCR靈敏度極高，實際應用中污染較嚴重，一旦有少量外源性污染就可出現假陽性結果。2.條件控制不當會造成各種產物突變，從而降低特異性和靈敏度。3.PCR技術需要以已知DNA模板作為擴充模板，必須知道引物的結合部位序列才能合成特異性引物，局限性較大。巧亦捷核酸一體機采用薄膜微流控技術，檢測過程為全封閉且自動進行核酸提取及PCR擴增，無需高標準的檢測環境，可很大程度上降低污染。結果快速、準確且穩定。PCR熒光探針法巧亦捷核酸檢測一體機可以為寵物PCR檢測提供嚴謹的準確結果，為檢測人員提供信心保證。

現如今，大多數寵物醫院還是使用膠體金方法對寵物疾病病原體進行檢測，而此種檢測方法準確性低，靈敏度不高，通常出現檢測結果不準確而導致寵物誤診。如果是誤診，寵物則無法得到很好的診療，甚至會死亡。巧亦捷在寵物病原體核酸檢測試劑系列中應用了PCR-熒光探針法，在PCR反應體系中加入特異的熒光探針，在實驗條件下對寵物病原體特異性基因片段進行擴增，根據熒光強度的變化進行檢測，并針對各種樣品進行了反應體系的優化，靈敏度可達1000個拷貝，具防污染功能，特別適合在寵物醫院使用。本產品操作簡便，簡單培訓即可掌握操作方法。

目前市面上有很多PCR儀器，一時間讓獸醫師無從選擇，但大多數都是PCR擴增儀，即需要人工進行核酸提取和純化。他們都有以下痛點：1、核酸提取和純化的操作麻煩并且需要專業的技術人員和場地，有些還需要配置高速離心機，人工核酸提取需要30~40分鐘并容易導致污染。2、人工反復開蓋加入或倒出試劑，容易導致人為和氣溶膠污染，導致結果不準確。因此針對寵物醫院來說，需要一臺集核酸提取、純化和擴增為一體的全自動核酸檢測儀。能更好的控制人工成本及試劑成本。傳染病是由某些具有致病性的微生物，如細菌、病毒等引起的，能夠在某種動物或多種動物之間傳播的一些疾病。

巧亦捷核酸一體機采用的探針法熒光PCR與常規PCR的不同之處在于：在上、下游引物外還加入了具有序列特異性的探針（探針本身具有熒光標記），該探針根據需要擴增的靶序列設計因此只能與待檢測序列結合，與染料法相比提高了實驗的特異性。目前市場上的探針主要種類有：TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等，其中以TaqMan探針應用寬泛。TaqMan探針的結構：長度與普通PCR引物類似，大約20bp左右。在5’與3’端各標記有一個熒光基團，5’的熒光基團稱為報告基團（Report），3’的熒光基團稱為淬滅基團（Quencher）。TaqMan探針的性能：在探針結構完整的情況下用特定的波長激發報告基團，由于報告基團與淬滅基團的空間位置很近，因此報告基團能夠通過FRET（FluorescenceResonanceEnergyTransfer）將接受的能量轉移到淬滅基團，使后者以發射熒光或熱量的方式釋放能量，而報告基團并不發射特定波長的熒光信號。PCR在常見傳染病、**、遺傳病、寄生蟲病、優生優育、法醫學等領域中有相當高的實際應用價值。蘇州熒光PCR儀器

巧亦捷希望能更好的去為每一只動物提供專業的檢測服務。PCR熒光探針法

美國批發產業與中國有所不同，和美國相比，中國的產業仍處于初創期。在經濟新常態下，中國大批發產業憑借獨特資源和市場優勢，一舉成為資本角逐的重點領域之一。有關機構預測，中國批發產業規模未來5年年均復合增長率約為27.26%。國外的谷歌、蘋果等公司，國內的阿里巴巴、騰訊、萬科、保利、平安人壽、萬達等企業都根據自身優勢扎根大健康領域。拋開生產型的公共服務屬性，在市場環境中，企業競爭的秘訣是要創造稀缺，結合消費者高、中、低不同等級的需求，并成為難以替代的產品。醫藥健康上下游未整體規劃，醫用物流公司十分分散，許多下游需求店鋪及用戶因物流體系不完善而放棄該種醫藥的引入和使用。由于醫用藥保存條件要求十分高，存儲倉庫與冷藏運輸車等的建設與運行成本便居高不下，使得醫藥冷鏈物流從建設到運營中的成本都遠超于傳統物流成本。首先，完善促進薄膜微流控核酸檢測一體機，動物核酸診斷試劑，薄化學發光免疫分析一體機，貓呼吸道5聯檢發展的相關政策，優化產業發展環境。第二，加大對大健康前沿領域支持，技術帶領健康科技發展。第三，消滅體制機制障礙，催生更多薄膜微流控核酸檢測一體機，動物核酸診斷試劑，薄化學發光免疫分析一體機，貓呼吸道5聯檢發展模式。第四，大力發展與薄膜微流控核酸檢測一體機，動物核酸診斷試劑，薄化學發光免疫分析一體機，貓呼吸道5聯檢相適應的高等教育事業。PCR熒光探針法

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