分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度,對該物質進行定性或定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區,(2)380~780nm的可見光區,(3)2.5~25μm(按波數計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度,所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定,定期進行校正檢定。MicroDrop基座模式下光程1.0、0.2、0.1和0.05mm自動調整。河北超微量超微量分光光度計菌液檢測
傳統分光光度計:
樣品體積要求大,絕大部分要50μL以上;
需使用比色皿,每次換樣品時,比色杯需要清洗,工作繁重;
光程一般為10mm,樣品需要稀釋,測量濃度范圍小;
燈源一般由氘燈(紫外)和鎢燈(可見)組成,壽命短;
需要預熱半個小時以上;
顯示吸光度值,不顯示濃度值;
儀器體積大,質量重;
超微量分光光度計;
所需樣品體積小,*需1~2μL;
不需要比色皿,用移液槍直接將樣品滴加到檢測平臺上;
具有多個光程(電機控制自動選擇光程),樣品無需稀釋,測量范圍可達到常規分光光度計的50倍;
氙氣閃光燈為燈源,壽命長,性能穩定;
不需要預熱,可隨時檢測;
顯示吸光度值的同時,程序直接給出濃度值(核酸、蛋白和熒光染料)。
天津性價比高超微量分光光度計蛋白檢測分光光度計是將成分復雜的光,分解為光譜線的科學儀器。
Micro Drop比色皿檢測基本操作:
1. 準備好兩個比色皿,一個加入空白檢測液,一個加入樣品,保證加入的液體量足夠,能蓋過光束,光束(2mm寬)位置在比色皿底部以上8.5mm的位置,請按照比色皿生產廠家的建議加入液體。
2. 抬起樣品臂,把比色皿插入到儀器中,插入比色皿時要注意透光面,與儀器上面的光路指向的方向相對應。
3. 在做比色皿檢測時樣品臂必須放下來。
4. 在Micro Drop軟件上的“選項”框中選擇“使用比色皿”, 插入比色皿,勾選基線校正,設置相應參數進行空白檢測及檢測。
5. 當檢測完成后,移出比色皿,倒出樣品,清洗干凈比色皿。
Micro Drop可以檢測45-48mm的10mm光程的比色皿。當使用微量,半微量或者超微量的比色皿時,我們建議使用周邊不透明的比色皿,不透明的比色皿保證了光穿過樣本后全部到達檢測器。而透明的比色皿會讓那些沒有透過樣本的光也到達檢測器,這樣會導致樣品(特別是低濃度樣品)的檢測不準確。
當檢測的波長為紫外區域時(<340nm),要使用石英比色皿,這樣才能透過紫外光。雖然有一些制造商提供紫外透過的一次性塑料比色皿,但是即使質量比較好的塑料比色皿也不能讓低于220nm以下波長的紫外光透過,而大部分玻璃和塑料比色皿是完全紫外非透過性的。
一般單光束的分光光度計都會推薦相配的比色皿,而許多比色皿生產廠家都有嚴格的質控來保證比色皿的性能而不用在換比色皿時需要校準,這些比色皿都可以用在本產品上。
BCA法的原理是蛋白在堿性溶液里與Cu2+形成紫色化合物,吸收峰在562nm波長。
分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系如下式:
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度;
I0為入射的單色光強度;
I 為透射的單色光強度;
T 為物質的透射率;
k 為摩爾吸收系數;
L 為被分析物質的光程,即比色皿的邊長;
c 為物質的濃度;
物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標準品或對照品同時操作。
測試只在可見光區有吸收的樣品時使用玻璃比色皿。山東超微量分光光度計
MicroDrop可連接電腦/平板電腦,實現本地一指控制;WiFi無線連接功能,節省時間和空間。河北超微量超微量分光光度計菌液檢測
使用Micro Drop可以方便地使用微量樣品進行紫外-可見分光檢測:
1. 不用稀釋就可以檢測濃度小于15000ng/μl(dsDNA)的核酸濃度;
2. 普通的紫外-可見分光光度檢測;
3. 純蛋白濃度檢測(A280);
4. 微陣列和Protein & Labels應用中的熒光染料基團檢測;
5. BCA蛋白定量分析;
6. Bradford蛋白定量分析;
7. Lowry法蛋白定量分析;
8. Pierce 660nm蛋白定量分析;
9. 微生物細胞培養檢測。
上海寶予德科學儀器有限公司主營超微量分光光度計,歡迎大家來電咨詢!
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