超微量分光光度計比色法測定蛋白質濃度:
蛋白質通常是多種蛋白質的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry等幾種方法。
Lowry法:以**早期的Biuret反應為基礎,并有所改進。蛋白質與Cu2+反應,產生藍色的反應物。但是與Biuret相比,Lowry法敏感性更高。缺點是需要順序加入幾種不同的反應試劑;反應需要的時間較長;容易受到非蛋白物質的影響;含EDTA,Tritonx-100等物質的蛋白不適合此種方法。
Micro Drop的基座模式可檢測0.5-2μl的樣本。陜西高靈敏度超微量分光光度計菌液檢測
超微量分光光度計主要是用來快速檢測一些樣品,比如蛋白、核酸等,幾乎每一個分析實驗室都離不開分光光度計,那么,超微量分光光度計怎么使用呢?***小編就Micro Drop為例,給大家介紹一下超微量分光光度計使用方法。
在此之前,我們先來了解一下超微量分光光度計的原理,微量分光光度計是利用光源通過光片調整光坡長,射入樣品液體中,再射入光電檢測器將光能轉換成電訊號。由樣本及空白水樣間所吸收之光能量差,與標準液之能量吸收值相比較,便可定樣本中待測物濃度。Micro Drop為一款全光譜波長超微量分光光度計,適用于更寬濃度范圍的樣品檢測,操作簡便,即擦即測。
貴州性能穩定超微量分光光度計探針檢測ε 摩爾吸光系數(Lmol-1cm-1),它與吸收物質的性質及入射光的波長λ有關。
Micro Drop為一款全波長(185~910nm)超微量紫外可見分光光度計,不僅提供了便于測量小劑量樣本的基座模式,也可以使用傳統的比色皿來進行樣本檢測。
基座模式下,本產品可以檢測0.5-2μl的樣本,而且檢測具有非常高的準確性和重復性。使用基座模式檢測樣本時,樣本保留系統應用了表面張力來把樣本保留在兩根檢測光纖中間,這使得儀器可以檢測較高濃度的樣本而不用稀釋,測量濃度范圍可達普通分光光度計檢測濃度范圍的200倍,且可實時調控光纖之間的液柱高度,以獲得更準確的檢測數據。相對于傳統的比色皿檢測方法,基座模式免去了復雜的比色皿清洗過程,只需使用無塵紙擦拭,清理簡便。另外,對于濃度低、易揮發或者表面張力比較低不易形成液柱的樣品,可以使用比色皿進行測量。
開機后,按鈕亮起并持續保持光亮,在檢測過程中,按鈕指示燈會閃爍表示儀器正在運行中。本產品無需預熱,即可直接進行測量,操作簡單,快捷,且軟件可以直接給出濃度值。此外,本產品體積小,質量輕,便于攜帶。
分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系如下式:
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度;
I0為入射的單色光強度;
I 為透射的單色光強度;
T 為物質的透射率;
k 為摩爾吸收系數;
L 為被分析物質的光程,即比色皿的邊長;
c 為物質的濃度;
物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標準品或對照品同時操作。
Micro Drop超微量采用新一代的2048線性CCD檢測單元,擁有更高的靈敏度和精確度。
超微量分光光度計不僅涵蓋了可見光分光光度計的功能而且也可以進行紫外分光光度計的應用:
(二)UV-VIS常規可見-紫外檢測:
全波長超微量分光光度計可以像普通的紫外-可見分光光度計一樣行使功能。如BIO-DL MicroDrop可以顯示從185到910nm的光波下樣品的吸光值。**多可以同時指定檢測40個波長下的吸光值并把數據顯示在報告中。
(三)蛋白質的直接定量(UV法):
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
朗伯一比爾(Lambert - Beer)定律是分光光度法定量分析依據的基本原理。青海操作簡便超微量分光光度計菌液檢測
Micro Drop微陣列檢測功能可以篩選有效的熒光標記雜交探針用于芯片試驗。陜西高靈敏度超微量分光光度計菌液檢測
分光光度計是一種分析測量光譜的儀器,因為應用需求的不同,分光光度計有著不同的種類。分光光度計按照波長及應用領域的不同可以分為:
(1)可見光分光光度計:用來測量待測物質對可見光(400~760nm)的吸光度并進行定量分析的儀器,稱為可見分光光度計。可在600nm測定細菌細胞密度。
(2)紫外分光光度計:紫外可見分光光度計用來測量待測物質對可見光或紫外光(200~760nm)的吸光度并進行定量分析的儀器。可以測定核酸和蛋白的濃度,也可以測定細菌細胞密度。紫外分光光度計又可分為單光束,假雙光束,雙光束。
(3)紅外分光光度計:一般的紅外光譜是指大于760nm的紅外光譜,這是研究有機化合物**常用的光譜區域,能分析各種狀態(氣、液、固)的試樣。
(4)熒光分光光度計:熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。應用于科研、化工、醫藥、生化、環保以及臨床檢驗、食品檢驗、教學實驗等領域。
(5)原子吸收分光光度計:該法主要適用樣品中微量及痕量組分分析常規儀器之一。是材料分析及質量控制部門進行常量、微量金屬(半金屬)元素分析的有力工具。
現今生命科學領域比較流行的超微量分光光度計是屬于紫外分光光度計的一種。
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