松江區專注干粉培養基及配套試劑創新服務

來源: 發布時間:2020-08-12

    對培養基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養基用,℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中,長時間高溫會使某些不耐熱物質遭到破壞,如使糖類物質形成氨基糖、焦糖,因此含糖培養基常在,℃15-30分鐘進行滅菌,某些對糖類要求較高的培養基,可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合;長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結合形成難溶性復合物而產生沉淀,因此,在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養基時,常需在培養基中加入少量螯合劑,避免培養基中產生沉淀,常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌,然后再混合,避免形成沉淀;高壓蒸汽滅菌后,培養基pH會發生改變(一般使pH降低),可根據所培養微生物的要求,在培養基滅菌前后加以調整。在配制培養基過程中,泡沫的存在對滅菌處理極不利,因為泡沫中的空氣形成隔熱層,使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時需要在培養基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產生,或適當提高滅菌溫度。兼性厭氧微生物在F值為+,在+。F值與氧分壓和pH有關。松江區專注干粉培養基及配套試劑創新服務

    應重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如為瓊脂培養基,應先用一部分水將瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發而丟失的水分,**后必須加以補足。培養基pH的初步調整培養基各成分完全溶解后,應進行pH的初步調正,因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,例如,牛肉浸液約可降低。而腸浸液pH卻會有***的升高。因此,對這個步驟,操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的**終pH,保證培養基的質量。pH調正后,還應將培養基煮沸數分鐘,以利培養基沉淀物的析出。培養基注意事項編輯語音培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、***及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配制好的培養液中取少量加入營養瓊脂于恒溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果。閔行區提供干粉培養基及配套試劑服務保障在培養基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽。

    血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝***中起重要作用,如SeO3、硒等。血清培養基主要問題1.血清的成份可能有幾百種之多,對其準確的成份、含量及其作用機制不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、***和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難。2.血清都是批量生產,各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標準化和連續性受到限制。3.對大多數細胞,在體內狀態,血清不是它們接觸的生理學液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內的正常狀態,血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時***另一類細胞生長(表皮細胞)。4.血清含一些對細胞產生毒性的物質,如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、細菌***等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡。5.動物個體不同,血清產地、批號不同,每批質量差異甚大,其成分不能保持一致。6.取材中可能帶入支原體、病毒,對細胞產生潛在影響,可能導致實驗失敗或實驗結果不可靠性。7.大規模生產中,血清來源越來越困難。

    二、培養基培養基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調pH至,若pH值超過,則大多數細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經滅菌μm孔徑濾膜濾過處理。三、血清培養中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養細胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制,可選用無血清培養基。四、***素為防止培養時期細菌的污染,可在培養基中添加適當***素,一般用量與組織細胞培養相同:卡那霉素100單位/毫升,或雙抗--青霉素100單位/毫升,鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素(PHA)非增殖期的細胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細胞,但在離體培養過程中,在PHA的作用下,可被刺激轉化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。經實驗測定其分裂高峰分別于培養后44-48小時和68-72小時。PHA有粘多糖,蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質起凝集作用。PHA***的細胞數隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細胞均被***為止,但PHA濃度過高會引起凝集,一般采用4%濃度為好。也受某些微生物代謝產物的影響。

    且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、***、無機物等,這些物質對促進細胞生長或***生長活性是達到生理平衡的。血清主要作用1.提供基本營養物質:氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質。2.提供***和各種生長因子:胰島素、腎上腺皮質***(氫化可的松、**)、類固醇***(雌二醇、睪酮、孕酮)等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。3.提供結合蛋白:結合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質,如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及***等,轉鐵蛋白攜帶鐵。結合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。4.提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。5.對培養中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞,如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發現的,則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經被***用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護細胞免受機械損傷,特別是在懸浮培養攪拌時,粘度起到重要作用。常常利用糖蜜(制糖工業中含有蔗糖的廢液)、乳清(乳制品工業中含有乳糖的廢液)。崇明區特色干粉培養基及配套試劑互惠互利

5、原料來源的選擇在配制培養基時應盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養基成分。松江區專注干粉培養基及配套試劑創新服務

    價格昂貴,是構成動物細胞培養對生產成本的主要部分之一。血清的質量標準血清質量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在指定的出生天數之內,取材過程應嚴格按照操作規程執行,制備出的血清要經過嚴格的質量鑒定。WHO公布的《用動物細胞體外培養生產生物制品規程》中的要求:1.牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具備適當的監測系統。2.有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。3.證明所用牛血清中不含對所生產疫苗病毒的***物。4.血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。5.無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。6.對細胞有良好的支持繁殖作用。我國在對牛血清的質量2000年版《中國生物制品主要原輔料質控標準》中提出比較嚴格的標準要求。包括蛋白質含量,細菌、***、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內***,支持細胞增殖檢查。培養基培養基配制編輯語音一、配制用水培養基的大部分是水,所以水的質量直接影響培養基的質量。按Waymouth標準,水的電阻應為200萬歐姆,一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。松江區專注干粉培養基及配套試劑創新服務

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