杭州細(xì)胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨

來源：發(fā)布時間：2024-06-07

LAMP法，即環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法（Loop-mediated isothermal amplification），在支原體檢測中的應(yīng)用具有以下特點(diǎn)和應(yīng)用場景：

1. 日常監(jiān)測：由于LAMP法的快速和簡便性，它適用于生物實(shí)驗(yàn)室的日常監(jiān)測，可以及時檢測出支原體的存在，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

2. 疾病診斷：LAMP法已被成功應(yīng)用于SARS、禽流感、HIV等疾病的檢測中，并在2009年甲型H1N1流感事件中發(fā)揮了重要作用。

3. 臨床應(yīng)用：LAMP法在臨床樣本的檢測中顯示出了快速、高靈敏度和穩(wěn)定性，可以用于檢測實(shí)驗(yàn)室樣本及臨床樣本中的支原體。

4. 多病原體檢測：LAMP法可以同時檢測多種病原體，包括肺炎支原體在內(nèi)的多種下呼吸道感*的病原體，為臨床診療提供詢證依據(jù)。

5. 與其他技術(shù)結(jié)合：LAMP法可以與CRISPR-Cas12a等其他技術(shù)結(jié)合，建立新的檢測方法，提高檢測的效率和準(zhǔn)確性。

支原體去除之后對細(xì)胞檢測有無影響？杭州細(xì)胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨

qPCR法，即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Quantitative Polymerase Chain Reaction）法，是一種高度靈敏和特異的分子生物學(xué)技術(shù)，用于檢測和定量DNA序列。在支原體檢測中，qPCR法的原理主要包括以下幾個步驟：

1. DNA提取：首先從待測樣本中提取DNA，這可能包括細(xì)胞培養(yǎng)上清液或組織樣本中的支原體DNA。

2. 設(shè)計特異性引物：針對支原體的保守DNA序列，如16S rRNA基因，設(shè)計特異性的DNA引物。

3. 熒光標(biāo)記探針：使用熒光標(biāo)記的探針，該探針與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)，能夠在PCR擴(kuò)增過程中與擴(kuò)增的DNA結(jié)合。

4. Ct值確定：Ct值（閾值循環(huán)數(shù)）是指在PCR反應(yīng)中，熒光信號強(qiáng)度超過預(yù)定閾值的循環(huán)次數(shù)。Ct值越低，表示樣本中支原體DNA的量越多。

5. 定量分析：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法或相對定量法，將Ct值轉(zhuǎn)換為支原體DNA的定量結(jié)果。

qPCR法的優(yōu)勢在于其高靈敏度和特異性，能夠檢測到非常低水平的支原體污染，并且可以在短時間內(nèi)提供結(jié)果，這對于需要快速檢測的生物制品生產(chǎn)和細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量控制非常重要

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細(xì)胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點(diǎn)：

1. 無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)：支原體是沒有細(xì)胞壁的微生物，這使得許多作用于細(xì)胞壁的抗*素對支原體無效。

2. 微小體積：支原體體積小，能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜，例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。

3. 隱匿性：支原體污染初期很難被察覺，它們在普通光學(xué)顯微鏡下幾乎不可見，因此細(xì)胞被支原體污染后，前期很難被發(fā)現(xiàn)。

4. 傳播途徑多樣：支原體可以通過細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞懸液、細(xì)胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。

5. 污染源：支原體污染源包括細(xì)胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚，以及細(xì)胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。

6. 環(huán)境因素：實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、試驗(yàn)臺、超凈臺、培養(yǎng)箱等可能被支原體污染，引起細(xì)胞的污染。

7. 抗*素耐藥性：支原體可能對某些抗*素產(chǎn)生耐藥性，使得治*效果變差。

8. 檢測和清理方法的局限性：一些傳統(tǒng)的支原體檢測和清理方法可能不夠靈敏或有效，導(dǎo)致難以徹底清理支原體

對于同一個樣品，如果一步法恒溫試劑盒檢測結(jié)果為陽性，而PCR檢測為陰性，可能的原因包括：

1. 檢測的支原體種類不同：一步法恒溫試劑盒可能檢測的支原體種類更多，例如可以涵蓋27種支原體，而PCR檢測可能只針對常見的12種支原體進(jìn)行檢測。因此，如果樣品中污染的支原體種類不在PCR檢測的范圍內(nèi)，就可能出現(xiàn)一步法檢測為陽性而PCR檢測為陰性的情況。

2. 靈敏度的差異：PCR方法的靈敏度可能高于一步法恒溫檢測法。PCR可以檢測到低至單個拷貝的支原體，而一步法恒溫檢測可能需要更高的支原體拷貝數(shù)，例如10^3^個拷貝。如果樣品中支原體的數(shù)量低于一步法檢測的靈敏度閾值，PCR檢測可能無法檢測到，導(dǎo)致陰性結(jié)果。

3. 樣品中可能含有抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì)：如果樣品中存在PCR反應(yīng)的抑制物，可能會影響PCR的擴(kuò)增效率，導(dǎo)致即使存在支原體，PCR檢測也可能呈現(xiàn)陰性結(jié)果。

4. 試劑盒的特異性和交叉反應(yīng)：一步法恒溫試劑盒可能具有更高的特異性，減少了與其他微生物的交叉反應(yīng)，從而在PCR檢測為陰性時仍能準(zhǔn)確檢測到支原體的存在。

支原體檢測假陰性的原因？

方法	靈敏度	優(yōu)勢	劣勢
培養(yǎng)法	☆☆☆	ü 便捷 ü 便宜 ü 金標(biāo)準(zhǔn)	ü 費(fèi)勞力 ü 耗時長 ü 需要特定的培養(yǎng)基 ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基
DNA染色 (DAPI or Hoescht)	☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 可能難以判讀結(jié)果 ü 無法鑒別支原體種屬 ü 可能假陽性可能性
間接染色	☆☆☆	ü 迅速 ü 便宜 ü 易檢測	ü 費(fèi)時 ü 需要細(xì)胞系指示
ELISA	☆☆	ü 迅速 ü 客觀，易判讀結(jié)果 ü 可以鑒別支原體種屬	ü 受抗體限制 ü 價格高
免疫染色	☆☆	ü 迅速 ü 可檢測支原體種屬 ü 價格略高	ü 可檢測的支原體種屬有限
放射自顯影	☆☆	ü 迅速	ü 難以判讀結(jié)果 ü 無法鑒別支原體種屬 ü 費(fèi)勞力
生物發(fā)光	☆☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 難以判讀結(jié)果 ü 無法鑒別支原體種屬
PCR	☆☆☆	ü 便宜 ü 迅速 ü 具有特異性	ü 可能假陽性可能性 ü 檢測特異性依賴引物特異性 ü 需要提取DNA
Real-Time PCR	☆☆☆	ü 便捷 ü 迅速 ü 具有特異性 ü 結(jié)果可靠 ü 高通量	ü 可能假陽性可能性 ü 檢測特異性依賴引物特異性 ü 需要提取DNA
LAMP	☆☆	ü 便捷 ü 無需DNA提取 ü *需10min左右的實(shí)驗(yàn)操作時間 ü 具有特異性 ü 高通量	ü 可能假陽性可能性 ü 檢測特異性依賴引物特異性細(xì)胞培養(yǎng)中污染了支原體會怎么樣？廣州支原體預(yù)防試劑貨期

支原體去除的原理是什么？杭州細(xì)胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨

細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染，可以采取以下一些方法嘗試去除污染：

1. 抗*素治*：使用針對支原體有效的抗*素，如四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類等。根據(jù)搜索結(jié)果，可以加入高濃度抗*素進(jìn)行沖擊治*，例如慶大霉素 200ug/ml，四環(huán)素10ug/ml，卡那霉素50ug/ml，并維持24-48小時后再換入常規(guī)培養(yǎng)液。

2. 加溫處理：支原體不耐熱，可以將細(xì)胞置于41°C中處理5-10小時以殺滅支原體。但需注意，高溫也可能對細(xì)胞造成傷害，因此需要預(yù)先確定對細(xì)胞影響較小的處理時間。

3. 使用支原體清除劑：市場上有專門的支原體清除劑，按照產(chǎn)品說明使用。

4. 使用支原體清*培養(yǎng)基：如Procell支原體清*培養(yǎng)基，這類產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分，可以抑制支原體生長并挽救珍貴細(xì)胞。

5. 物理方法：一些實(shí)驗(yàn)室采用過濾的方法，使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾培養(yǎng)基和試劑，以阻止支原體的侵入。

6. 細(xì)胞傳代：在一些情況下，通過細(xì)胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度。

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上海世途科生物(CYTOCH)是一家生命科學(xué)上游工具類企業(yè)。聚焦于細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的化學(xué)技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)與生產(chǎn)，產(chǎn)品覆蓋細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品如胎牛血清，支原體檢測，支原體去除試劑等，細(xì)胞轉(zhuǎn)染產(chǎn)品如轉(zhuǎn)染試劑，及細(xì)胞檢測產(chǎn)品如增殖凋亡檢測，報告基因等多個科研場景，給終端客戶提供良好的產(chǎn)品以及服務(wù)。

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標(biāo)簽：支原體免疫沉淀

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