三：貼壁細胞染色1、將貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上。2、從培養基中移走蓋玻片，吸走過量培養液，但要使表面保持濕潤。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。4、37℃孵育細胞2~20min，不同的細胞比較好培養時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優化體系以得到均一的標記效果。5、吸干染料工作液，用培養液洗蓋玻片2~3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5~10min，然后吸干培養基。但要使表面保持濕潤。四：結果檢測樣品可在培養基中進行檢測，可通過熒光顯微鏡成像或流式細胞儀分析。Super Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）琥珀酰亞胺酯熒光染料。甘肅流式細胞熒光染料
藻紅蛋白-藻紅蛋白(PE)是一種紅色蛋白色素復合物，屬于藻膽蛋白家族。它可以在紅藻和隱植物中找到，它作為葉綠素色素的附屬物。在生物科學中，熒光團可以與蛋白質結合，例如用于抗原檢測的抗體等，因為它能夠發出明亮的熒光。由于熒光團往往會很快發生光漂白，因此很少在熒光顯微鏡中使用。它經常用于流式細胞術。※別藻藍蛋白(APC)-與藻紅蛋白一樣，別藻藍蛋白也屬于藻膽蛋白家族，是從紅藻中分離出來的。在594和633nm的激光線激發下，熒光團的比較大吸光度在650nm處，而熒光發射峰在66nm處。與熒光素偶聯物相比，熒光團的靈敏度已顯示高5至10倍，并具有許多其他有益特性，包括大斯托克斯位移、高水溶性、長波長發射和耐猝滅。雖然別藻藍蛋白通常不用于需要光穩定性的應用，但它***用于流式細胞術、ELISA、微陣列等過程以及各種依賴高靈敏度的應用。國產熒光染料DIL熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。
熒光染料***用于生物學和醫學研究中，如流式細胞術、熒光顯微鏡和免疫組化等，其中熒光淬滅是一個關鍵的考量因素，因為它直接影響到實驗結果的可靠性和準確性。FITC（異硫氰酸熒光素）是一種常用的綠色熒光染料，具有較高的熒光量子產率和激發效率。然而，FITC的一個主要缺點是容易受到環境因素的影響，如pH值、溫度、溶劑和離子強度等，從而導致熒光淬滅。此外，FITC的光穩定性相對較低，長時間的光照會導致其熒光強度降低。CY5.5是一種遠紅外熒光染料，具有較長的激發和發射波長，因此適用于多色熒光標記和深組織成像。CY5.5相對于FITC來說，具有更好的光穩定性，不易受到環境因素的影響。此外，CY5.5的熒光量子產率也較高，使其在熒光標記實驗中表現出色。AlexaFluor647是另一種常用的紅色熒光染料，具有與CY5.5相似的長波長激發和發射特性。AlexaFluor647的優點是光穩定性較好，可以承受長時間的光照而不易淬滅。此外，它在多種溶劑和pH值范圍內都能保持穩定的熒光性能，因此在復雜的生物樣本中表現出色。
南京星葉生物科技有限公司Super Fluor系列（效果同Alexa Fluor 系列），質優價廉。
花青類熒光染料屬于共振染料，其特征在于具有離域電荷的氮原子（兩個氮原子）之間的聚甲炔染料。由于與生物分子的低非特異性結合以及明亮的熒光，花青類熒光染料已成為一些當下流行的用于標記核酸的熒光染料。花青類染料分為兩大類：非磺化花青類染料-該組中的一些染料包括cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7和cy7.5。在大多數情況下，這些染料的特點是水溶性低，但胺的鹽酸鹽和酰肼除外。它們首先溶解在有機溶劑（共溶劑）中，然后在生物分子標記期間添加到含有生物分子的溶液中。而“Cy”**花青，***個數字**存在于亞油啉基團之間的碳原子數。另一方面，添加0.5后綴以表示苯并稠合花青。這些熒光染料通常用于有機介質。磺化類花青染料-該組由磺基-Cy3、磺基-Cy5和磺基-Cy7組成。顧名思義，這些花青的特征是一個磺基，它有助于染料分子在水相中的溶解。與非磺化花青相比，這些花青更易溶于水，因此不需要溶解在有機溶劑中進行標記。磺化花青通常用于標記疏水性蛋白質、水溶液中的納米顆粒以及可能被DMSO或DMF變性的敏感蛋白質。兩組染料均可用于標記以下生物分子：肽、寡核苷酸和DNA、抗體、可溶性蛋白質。CY5熒光染料是一種被廣泛應用于生物分子檢測和熒光成像等領域的高效、穩定的熒光標記試劑。
Cy5:激發波長633/635nm，比較大發射波長670nm。1)其標記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細胞儀;2)在流式細胞儀的FL4通道檢測;3)適用于熒光顯微鏡技術;4)同樣為小分子染料，非常適合需小分子染料的流式細胞術，熒光強度低于APC。5)與單核和粒細胞非特異性結合多，易出現假陽性結果。
5、PE:激發波長488nm，比較大發射波長575nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氯離子激光器的流式細胞儀:2)在流式細胞儀的FL2通道檢測;3)其熒光泯滅性強，不適用于傳統的熒光顯微鏡技術，但適用于激光共聚焦顯微鏡技術。
6、PE-TR:激發波長488nm，比較大發射波長615nm。1)在BeckmanCoulter流式細胞儀的FL3通道檢測;2)可適用于小功率激光器的流式細胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細胞儀。
7、PE-AlexaFluor610:激發波長488nm，比較大發射波長628nm。1)在BeckmanCoulter流式細胞儀的FL3通道檢測;2)熒光強度高;3)可適用于小功率激光器的流式細胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細胞儀。 目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。廣州熒光染料納米
D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。甘肅流式細胞熒光染料
為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質，但使用熒光染料具有其獨特的優勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動態范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進行熒光測量時不會遇到這個問題，因為只有少數材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強大的協議，并且可以自動化用于高通量應用。甘肅流式細胞熒光染料