所需的CY3-NHS酯的量取決于待標記蛋白的量，以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例：假設所需的標記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000)，用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯，得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL，詳細計算過程如下：1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150，000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.運行偶聯反應1)將室溫新鮮制備的10mg/mLCY3-NHS酯緩慢加入到0.5mL蛋白質樣品中于溶液中，輕輕搖動混勻，然后短暫離心，將樣品收集于反應管底部。請勿混勻，否則2)將反應管安置避光處，在接下來的間隔輕輕蛋白水解60分鐘。10-15分鐘，輕輕翻轉幾次以充分混合5.偶聯偶聯物以下方案是使用SepHadexG-25柱封閉染料-偶聯偶聯物的范例。1)根據制造說明準備SepHadexG-25柱。2)將反應混合物(來自“Runconjugationreaction”)加載到SepHadexG-25柱的頂部。3)一旦樣品在頂部樹脂表面下方運行，立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需樣品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。FITC熒光染料標記方法。中國澳門熒光染料脂質
小動物***熒光成像技術是現***物醫學研究領域的一項重要技術，因其具有操作簡單、實時直觀、靈敏度高、實驗成本低等特點，已廣泛應用于生命科學、醫學研究及藥物開發等方面。納米材料在生物醫學領域得到廣泛應用，旨在解決傳統醫學面臨的各種醫學挑戰，包括生物利用度差，靶向特異性受損，全身和***毒性等。納米材料具有很多與眾不同的優點，比如多功能性、大的負載量、靶向性、血液循環時間長等。納米材料在生物醫學中起著關鍵作用，可以有效攜帶成像探針、***劑或生物材料并傳遞至靶點，如特定的***、組織甚至細胞。光學成像主要包括生物發光（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，ＢＬＩ）和焚光成像（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，Ｆ１）兩種技術。前者利用焚光素酶基因（如ＦＬＵＣ，ＲＬＵＣ，ＧＬＵＣ）標記細胞或ＤＮＡ，其表達產物與莖火蟲素類底物反應產生熒光。后者包括多種熒光蛋白基因（如ＧＦＰ，ＲＦＰ，ＹＦＰ等）、有機熒光染料、熒光上轉換納米粒子、量子點等的應用。 中國澳門熒光染料脂質小動物成像熒光染料能夠選擇性地與目標細胞或組織結合。
三：貼壁細胞染色1、將貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上。2、從培養基中移走蓋玻片，吸走過量培養液，但要使表面保持濕潤。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。4、37℃孵育細胞2~20min，不同的細胞比較好培養時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優化體系以得到均一的標記效果。5、吸干染料工作液，用培養液洗蓋玻片2~3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5~10min，然后吸干培養基。但要使表面保持濕潤。四：結果檢測樣品可在培養基中進行檢測，可通過熒光顯微鏡成像或流式細胞儀分析。
三、流式細胞儀分析1、取對數生長期的細胞，接種到孔板，過夜培養。2、如果要進行藥物刺激，在細胞中加入感興趣的藥物進行干預，繼續培養一定時間后，收集細胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細胞，37℃避光孵育15min或更長時間。【注意】：由于細胞種類和實驗體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時間可以根據預實驗或參考文獻自行調整。4、用流式細胞儀檢測。
四、實驗案例1、取對數生長期A549細胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養基）,37℃培養箱培養4-24h待其貼壁，以便后續實驗操作.2、棄掉培養液，PBS洗滌兩次.3、用培養基（無血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細胞類型和細胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察. DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于細胞核染色，可將細胞核染成藍色。
D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產生典型的黃綠色光。該反應的 560 nm 化學發光在幾秒鐘內達到峰值，當底物熒光素過量時，光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是用于研究和藥物篩選的流行報告基因。化學發光技術幾乎沒有背景，使得 luc 報告基因成為檢測低水平基因表達的理想選擇。標準閃爍計數器可以可靠地測量低至 0.02 pg 的熒光素酶。除了作為基因表達報告者的作用外，熒光素酶還常用于極其靈敏的 ATP 檢測中[1]。我們提供螢火蟲熒光素酶 (HY-P1004)、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B)。Cy5.5含有一個游離胺基,可與多種官能團共軛,包括NHS酯和環氧化合物。江西高分子熒光染料
Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）。中國澳門熒光染料脂質
SUPERGreenI（10,000×DMSO溶液，電泳級）儲存條件及注意事項4℃避光可保存12個月。本品用DMSO溶解，因DMSO的熔點是18.5℃，使用前請放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點●無毒性：屬花菁類染料，容易生物降解，無致*毒性。●靈敏度高：至少可檢出20pgDNA，高于EB染色法25～100倍。●信噪比高：樣品熒光信號強，背景信號低。●操作簡單：無須脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察。●適用范圍廣：可適用于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場凝膠電泳和毛細管電泳等。●使用方便：對分子生物學中常用的酶（如：Taq酶、反轉錄酶、內切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用。●經濟：價格比銀染便宜。中國澳門熒光染料脂質