在生殖醫學領域,卵母細胞的冷凍保存技術一直是研究的熱點,旨在提高女性生育能力的保存與利用。然而,傳統的紡錘體觀察方法往往需要對卵母細胞進行固定和染色處理,這不僅破壞了細胞的活性,還限制了對其發育潛能的深入評估。偏光成像技術,特別是Polscope偏振光顯微成像系統,通過利用紡錘體微管結構的雙折射性,實現了對紡錘體的無損觀察。這種技術無需對卵母細胞進行固定和染色,能夠在保持細胞活性的同時,實時、動態地觀察紡錘體的形態和變化。這不僅提高了觀察的準確性和可靠性,還避免了傳統染色方法可能帶來的細胞損傷和誤差。紡錘體在細胞分裂中的精確調控是生物體維持遺傳穩定性的關鍵。美國偏光成像紡錘體Oosight Basic
在生殖醫學與輔助生殖技術的快速發展中,卵母細胞的冷凍保存技術顯得尤為重要。然而,卵母細胞,尤其是其內部的紡錘體結構,對低溫環境極為敏感,冷凍過程中的損傷往往影響解凍后卵母細胞的存活率及發育潛能。偏光成像技術,特別是Polscope偏振光顯微成像系統,結合了液晶可變減速器、電子成像及數碼成像技術,能夠捕捉到具有雙折性特征的細胞結構,如紡錘體。紡錘體由微管等高分子物質有序排列而成,這些物質能夠使偏振光發生折射現象,從而被檢偏器捕捉并通過偏振光顯微鏡觀察。這一技術無需對細胞進行固定和染色,能夠動態評估卵母細胞的質量與紡錘體的相關性,為卵母細胞冷凍保存的研究提供了新的手段。美國偏光成像紡錘體卵質量評估紡錘體的異常會導致細胞分裂錯誤,進而引發染色體不穩定性和遺傳性疾病。
對卵子進行評估:胚胎學家指出:有紡錘體出現的卵母細胞有較高的受精率和胚胎發育率,也就是說紡錘體的存在與否,可以用來評價卵母細胞胞漿的成熟度。因此胚胎學家有三次通過紡錘體對我們的卵子進行評估的機會:(1)胚胎學家可以利用偏振光顯微鏡對卵子的紡錘體進行觀察,通過定量分析數據對卵子進行分級,挑選出正常分裂的卵子,也就是出現紡錘體的卵子,進而提高試管嬰兒的受精率。(2)胚胎學家還可以通過紡錘體來確定體外培養成熟卵子(IVM)的成熟期,進而為體外成熟卵子進行評估,***提高試管嬰兒的受精率和胚胎發育率。(3)由于紡錘體對環境溫度的改變非常敏感。溫度降至25℃時,只需要10分鐘的時間,就會紡錘體造成不可逆的損傷。所以冷凍復蘇過程中溫度改變很有可能對卵母細胞紡錘體和染色體造成損傷。因此胚胎學家可以應用紡錘體成像幫助選擇復蘇后具有正常紡錘體的卵母細胞,進而可以提高受精率、卵裂率和臨床妊娠率。綜上所述,通過***細胞的紡錘體成像技術可以避免輔助生殖技術對卵母細胞紡錘體的損傷,有助于選擇具有正常紡錘體的卵母細胞,有利于提高受精率、卵裂率和臨床妊娠率,利用更科學的方式,將讓求子路的終點不再那么遙遠。
解凍后的卵母細胞在無損觀察技術的支持下,可以直接進行紡錘體觀察,無需進行任何形式的固定和染色處理。這一技術能夠迅速評估解凍后卵母細胞的質量,包括紡錘體的形態、位置、穩定性等關鍵指標,為后續的受精和胚胎發育提供重要參考。無損觀察紡錘體技術已逐步應用于臨床輔助生殖技術中。醫生可以在不破壞卵母細胞活性的情況下,通過該技術評估其質量并選擇合適的卵母細胞進行受精和胚胎移植。這不僅提高了妊娠率和胚胎質量,還減少了因卵母細胞質量不佳而導致的移植失敗和流產風險。紡錘體的異常可能與人類衰老和疾病的發生有關。
微管重組技術是體外構建紡錘體模型的基礎。通過在體外重組微管蛋白,可以形成類似于細胞內紡錘體的微管結構。常見的方法包括:從牛腦或其他來源中純化微管蛋白,確保其純度和活性。在體外條件下,通過控制溫度、離子濃度等參數,誘導微管蛋白組裝成微管。使用微管穩定劑(如紫杉醇)或調節蛋白(如MAPs)穩定微管結構,模擬細胞內的微管動態變化。動力蛋白和調節蛋白是紡錘體功能的重要組成部分。通過在體外模型中添加這些蛋白,可以模擬紡錘體的動力學行為。常見的方法包括:添加動力蛋白(如dynein、kinesin)以模擬微管的運動和動力學行為。添加調節蛋白(如AuroraB、Mad2)以模擬紡錘體檢查點的功能。紡錘體的形成與細胞骨架的重構密切相關。上海克隆紡錘體透明帶
紡錘體在細胞分裂中的穩定性對于細胞存活至關重要。美國偏光成像紡錘體Oosight Basic
冷凍與解凍過程中涉及多個環節,包括溫度控制、時間控制、冷凍保護劑的添加與去除等。這些環節中的任何一步操作不當都可能導致紡錘體損傷。因此,需要不斷優化冷凍與解凍技術,以減少對紡錘體的不良影響。近年來,研究者們通過不斷嘗試和優化冷凍保護劑的配方,取得了進展。例如,甘油、二甲基亞砜(DMSO)等滲透性保護劑被用于哺乳動物卵母細胞的冷凍保存中,它們能夠迅速降低細胞內水分含量,減少冰晶形成。同時,一些非滲透性保護劑如蔗糖、海藻糖等也被發現對紡錘體具有一定的保護作用。美國偏光成像紡錘體Oosight Basic