單分子級別數字ELISA微量試劑

芯棄疾JX-8B數字ELISA，多重超敏、微量極速、靈活開放，每個實驗室都用得起的單分子免疫檢測產品 ，創新型多通道ELISA檢測；

芯棄疾JX-8B數字化高靈敏ELISA芯片檢測產品應用場景：適合生物實驗室、醫學實驗室、科研市場、產品預研、產品開發、ELISA檢測、動物疫病檢測等各種應用場景應用范圍：各種高靈敏多重免疫檢測，可替代各種ELISA試劑盒，及其他免疫檢測產品。

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是目前新型型的單分子檢測方法的低成本版、普及版！每個生物/醫學實驗室都用得起的單分子免疫檢測！！使用現有平臺就能做的單分子免疫檢測！！具有以下特點：多重、超敏、微量、極速、靈活、開放 每個生物/醫學實驗室都用得起的單分子免疫檢測；單分子級別數字ELISA微量試劑

芯棄疾JX-8B數字ELISA產品

每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測

動力學上，對于200,000個微球分散在100μL中，珠子之間的平均距離約為80μm。大小為TNF-α和PSA（分別為17.3和30kDa）的蛋白質將在不到1min的時間內擴散80μm。表明，在2小時的孵育過程中，蛋白質分子的捕獲不會受到限制動力學上。其次，必須有足夠的珠子被加載到陣列上以限制泊松噪聲。200,000個珠子加載到50,000孔陣列中，通常會導致20,000–30,000個微球被困在1mL孔中。對于典型的背景信號為1%活性微球（見下文），這種裝載導致背景信號為200-300個活性微球檢測到，對應于泊松噪聲的可接受變異系數（CV）為6-7%。第三，過高的微球濃度可能導致：a）非特異性結合增加，降低信噪比；以及b）分析物與微球的比例過低，導致活性微球的比例過低，從而導致泊松噪聲引起的高CV。這些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿；可在PMC2010年12月1日獲得。Rissin等人第5頁因素意味著每100μLoftest樣品含有20萬到100萬顆珠子是比較好的數字ELISA。同時，為了獲得可接受的背景信號（1%）和泊松噪聲）。 單分子級別數字ELISA微量試劑芯棄疾JX-8B單分子小型化ELISA檢測產品，低成本單分子檢測；

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我們已經開發了兩種臨床相關蛋白的檢測方法——前列腺特異性抗原（PSA）和腫瘤壞死因子α（TNF-α），以確定高酶標記物單體提供的靈敏度轉化為高靈敏度的檢測方法血液中的蛋白質。兩種蛋白質的數字ELISA如圖1所示。開發這些試驗的關鍵參數是：珠子濃度和兩種標記試劑（檢測試劑和酶偶聯物）的濃度。珠子濃度的選擇取決于幾個相互競爭的因素。首先，足夠的珠子必須在場以從熱力學和動力學中捕獲大部分目標分析物從熱力學角度看，100μL中有20萬個珠子，每個珠子大約有8萬個與之結合的抗體25相當于約0.3nM的抗體濃度，在該濃度下，抗體-蛋白平衡導致高捕獲效率（>70%）(D.M.R.，E.P.F.，D.C.D.，未發表工作）。

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數字ELISA測量蛋白質濃度遠低于傳統ELISA的能力源于兩種效應：1）SiMoA對酶標記的高度敏感性；以及2）通過數字化蛋白質檢測可以實現的低背景信號。任何免疫測定的靈敏度由其靈敏度決定。檢測技術到標簽，抗體親和力，試驗背景，以及背景測量值的變異（%CV）27.SiMoA對酶非常敏感標簽（圖2）為在數字ELISA中檢測亞飛摩爾濃度的標記蛋白提供了基礎。也就是說，對于給定親和力的抗體，其靈敏度為免疫測定將由測定背景決定，SiMoA的高標記靈敏度有助于降低這種背景。對照實驗表明，數字ELISA的背景來自于檢測抗體和酶的非特異性結合（NSB）與捕獲珠表面結合（補充表2）。AsSiMoA相比傳統檢測方法具有更高的標記靈敏度，明顯減少了檢測抗體（~1nM)和酶標記物（1–50pM)的需要，以檢測結合事件，與傳統方法相比（標記試劑濃度~10nM)。降低的標記物濃度減少了NSB到捕獲表面，從而導致背景信號明顯降低。 全自動加樣與圖像分析系統實現檢測流程自動化，熒光信號識別，結果可靠。

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單分子酶檢測到的比較低酶分子數假設蛋白質檢測分析的更終靈敏度為背景信號可能由非特異性相互作用產生。為了評估內在敏感性，我們通過將400,000個帶有生物素的珠子與不同濃度的酶綴合物鏈霉親和素-阝-半乳糖苷酶（S阝G）混合，創建了具有明確酶與珠子比例的珠子群體。為了方便起見，生物素化珠子是通過將生物素化DNA與功能化的珠子雜交提供的。互補DNA。[我們注意到，該實驗不應被視為敏感的DNA檢測；該檢測的敏感性受到非特異性相互作用的限制，如補充圖2所示，這些相互作用發生在酶綴合物和表面結合的DNA之間。 抗體篩選芯片高效篩選抗體配對，5μl 樣本即可測試多種組合，縮短研發周期。單分子檢測數字ELISA穩定性

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參考原理：血液中單個蛋白質分子的檢測有助于識別許多新的診斷性蛋白質標記物。我們報告了一種同時檢測數百至數千個單獨蛋白質分子的方法，該方法能夠檢測到非常低濃度的蛋白質。蛋白質被捕獲在顯微珠上，并用酶標記，每個顯微珠上有一個或零個酶標記的蛋白質。通過將這些顯微珠分離成50飛米的陣列反應室，單個蛋白質可以通過熒光想象檢測到。通過單化這些陣列中的分子，~10-20種酶可以在100μL（~10?19M）中檢測到。單個基于酶標記的分子酶聯免疫吸附試驗（數字ELISA)能夠檢測血清中臨床相關的蛋白質，其濃度（<10?15M）遠低于傳統ELISA3-5。數字ELISA在所有接受防冶性前列腺切除術的患者血清中檢測到前列腺特異性抗原，比較低至14fmol/mL（0.4fmol）。

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