ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。然而,影響Elisa試驗結果的因素很多,故加強各個環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優點。ELISA試劑盒特點:高效、靈敏、特異的抗體;穩定的重復性和可靠性;吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型;節省實驗經費。elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標液1PPM,就是1毫克/升,而作出標準數據為0.99毫克/升,就是說你的回收率是99%,這個與真實成分有密切的關系,說明方法的準確度。ELISA試劑盒結合在固相載體表面a的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。沙拉沙星檢測試劑盒
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以去除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。可以說在ELISA操作中,洗滌是較主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種。地克珠利檢測試劑盒試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
ELISA試劑盒實驗中,加樣后及時放人孵箱,標本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗徹底。剩余樣品及廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。人ELISA試劑盒洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈,每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是之后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。
雙抗體(原)夾心法,通常是結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。加入酶標記的抗原或抗體,通過反應也結合在固相載體上。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,根據呈色的深淺進行定性或定量分析。酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度。ELISA試劑盒方便試驗操作者準確地做稀釋工作。
Elisa試劑盒技術原理:(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。(2). 結合在固相載體表面a的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。(3). 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。(4). 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。(5). 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。(6). 加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。ELSIA操作步驟復雜,影響反應因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致。硝基咪唑類檢測試劑盒
間接ELISA用到酶標二抗,具有更高的靈敏度,也需要更少的標記抗體,更經濟。沙拉沙星檢測試劑盒
ELISA試劑盒的酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致病作用,應注意防護。有條件者應使用不致病、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。沙拉沙星檢測試劑盒
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